Kraujo paruošimo būdai DNR išskyrimui automatiniu "QIACube" aparatu

Šiaudytytė, Ieva

Dspace pagrindinis
→
Studentų baigiamieji darbai - Studijų programos
→
biomedicinos diagnostika
→
Peržiūrėti elementą

Kraujo paruošimo būdai DNR išskyrimui automatiniu "QIACube" aparatu

Šiaudytytė, Ieva

URI: http://dspace.kaunokolegija.lt//handle/123456789/1640

Data: 2019-06-14

Santrauka:

Tyrimo problema: ar iš fizikiniais veiksniais paveiktų kraujo ląstelių išsiskiria toks pats DNR kiekis? Tyrimo tikslas: išsiaiškinti tinkamiausią kraujo paruošimo būdą DNR išskyrimui automatiniu „QIACube“ aparatu. Tyrimo uždaviniai: 1. Aprašyti mokslinės literatūros šaltinius apie DNR išskyrimo būdus. 2. Palyginti iš skirtingais fizikiniais veiksniais paveiktų kraujo ląstelių išskirtos DNR koncentraciją ir švarumą. 3. Nustatyti koreliacijos ryšį tarp DNR koncentracijos ir švarumo iš skirtingai apruoštų kraujo mėginių. Tyrimo metodai: 1. Mokslinės literatūros analizė apie DNR išskyrimo būdus. 2. Kiekybinis tyrimo metodas DNR išskyrimas iš kraujoląstelių. 3. Statistinė duomenų analizė „Microsoft Excel 2016“ programa. Išvados: 1. Mokslinės literatūros duomenimis DNR galima išskirti iš visų biologinių medžiagų. DNR išskyrimui naudojami organiniai tirpikliai, chaotropiniai reagentai, silikagelio kolonėlės. 2. Didžiausios koncentracijos ir švariausia DNR gauta skiriant ją iš lizuoto kraujo ląstelių. Iš neapruošto ir iš šaldyto kraujo ląstelių išskirtos DNR koncentracija ir švarumas buvo ženkliai mažesni. 3. Koreliacijos ryšys tarp DNR koncentracijos ir švarumo labai silpnas. Lizuoto kraujo ląstelių koreliacijos teigiamas tiesinis ryšys tarp koncentracijos ir švarumo labai silpnas (r = 0,0016). Kraujo ląstelių koreliacijos neigiamas tiesinis ryšys tarp koncentracijos ir švarumo labai silpnas (r = -0,121). Šaldyto kraujo ląstelių koreliacijos teigiamas tiesinis ryšys tarp koncentracijos ir švarumo labai silpnas (r = 0,321).

Description:

Relevance of the work: The DNA isolation method should be quick and simple, requiring as few special techniques as possible to work with large numbers of samples at the same time, it should be clean enough after DNA purification to suit further research (D. Ambrasiene, 2007). According to Ali (2019), to release DNA from the blood, the cell membrane (physically or chemically) is first disrupted, and all the cellular components are released. Purpose of the research: to find out the best method of blood prepare for DNA extraction with automatic device QIAcube. Tasks of the research: 1. Describe literature sources on DNA isolation techniques. 2. Compare DNA concentrations and purity of blood cells affected by different physical agents. 3. Determine the correlation between DNA concentrations and purity. Methods of the empirical research: 1. Analysis of scientific literature on DNA isolation methods. 2. Quantitative research methods on isolation of DNA from blood cells. 3. Statistical data analysis with Microsoft Excel 2016 Program. Methodology: During the period of June-August 2018, at LSMU Laboratory of Genetics and Molecular Medicine (collaborative agreement No. F23-256), DNA was extracted with automatic device QIACube. Venous blood from 50 patients was used for the reaserch (for each patients, 3 tubes with EDTA). 50 tubes with blood samples were stored at + 4 ° C, 50 samples were exposed to lysis buffer containing salts, and 50 tubes with blood samples were stored at -80 ° C. Subsequently, DNA was used for all samples. DNA concentration and purity was measured. Results and conclusions of the research: 1. According to the scientific literature, DNA can be extracted from all biological materials. Organic solvents, chaotropic reagents, and silica gel columns are used for DNA extraction. 2. The highest concentrations and the purest DNA were obtained from lysed blood cells. DNA concentration and purity from untreated and frozen blood cells was significantly lower. 3. The correlation between DNA concentration and purity is very weak. The positive linear relationship between concentration and purity of lysed blood cells is very weak (r = 0.0016). The negative linear relationship between concentration and purity of blood cell correlation is very weak (r = -0.121). Positive linear relationship between concentration and purity of frozen blood cell correlation is very weak (r = 0.321).

Rodyti visą įrašą